Dokument: Untersuchungen zur Funktion und Struktur des Proteins Gal1p der Milchhefe Kluyveromyces lactis

Titel:	Untersuchungen zur Funktion und Struktur des Proteins Gal1p der Milchhefe Kluyveromyces lactis
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=2573
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20030723-000573-6
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Amuel, Carsten [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 3,67 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 09.02.2007 / geändert 09.02.2007
Beitragender:	Prof. Dr. Hollenberg, Cornelis P. [Gutachter]
Stichwörter:	Kluyveromyces lactis, Gal1p-Gal80p Wechselwirkung, Protein Wechselwirkung, Gal1p Protein Struktur, Galactose Induction, Chromatin Immuno Präziptation (CHIP)Kluyveromyces lactis, Gal1p-Gal80p interaction, Protein interaction, Gal1p protein structure, Galactose induction, Chromatin Immuno Preciptation (CHIP)
Dewey Dezimal-Klassifikation:	500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie
Beschreibungen:	Die transkriptionelle Induktion der am Galaktose-Metabolismus beteiligten Gene in Hefe erfolgt durch die Galaktose-abhängige Bindung von ScGal3p (in Saccharomyces cerevisiae) oder KlGal1p (in Kluyveromyces lactis) mit Gal80p. Diese Wechselwirkung unterbindet den inhibitorischen Effekt von Gal80p mit der Aktivierungsdomäne von Gal4p, der dann wieder die Transkription aktivieren kann. Mit Hilfe der Two-Hybrid-Analyse in S. cerevisiae wurden nach Mutagenese von Gal1 neue Interaktionsmutanten mit Gal80 isoliert. Fünf mutierte GAL1-Allele zeigten Austausche in der C-terminalen Region die keine Interaktion mit Gal80 aufweisen. Die Supprimierung solcher Interaktionsdefekte mit der Mutante gal80-R10 (M366V) zeigte wichtig Interaktionsbereiche von Gal1p mit Gal80p. Gal1 kann der Familie der GHMP-Proteine zugeordnet werden, von denen für einige Mitglieder bereits Kristallstrukturen vorliegen. Durch Homologie-Modelling auf Basis der publizierten Strukturen und unterstützt von einer 3 Å Struktur des Gal1 (in Zusammenarbeit mit Dr. J. Labahn, FZ-Jülich) wurde ein Strukturmodell für Gal1 entwickelt. Die Lokalisierung der Mutanten in diesem Modell ergeben Hinweise für den Mechanismus der Galaktose- und ATP-abhängigen Interaktion zwischen Gal1 und Gal80. Durch Chromatin-Immun-Präzipitationsexperimente (CHIP) in K. lactis konnte erstmalig gezeigt werden, dass Gal1 unter induzierenden Bedingungen im Zellkern an einen Gal80/Gal4-Komplex auf der DNA bindet. The induction of transcription of the galactose genes in yeast involves the galactose-dependent binding of ScGal3p (in Saccharomyces cerevisiae) or KlGal1p (in Kluyveromyces lactis) to Gal80p. This binding abrogates Gal80´s inhibitory effect on the activation domain of Gal4p, which can then activate transcription. Here we describe the isolation and characterization of new interaction mutants of K. lactis GAL1 and GAL80 using a two-hybrid screen. Moreover, we present the first structural model for Gal1p to be based on the published crystal structures of other proteins belonging to the GHMP (galactokinase, homoserine kinase, mevalonate kinase and phosphomevalonate kinase) kinase family and own X-ray diffraction data of Gal1p crystals at 3 ? resolution. The locations of the various mutations in the modelled Gal1p structure identify domains involved in the interaction with Gal80p and provide a structural explanation for the phenotype of constitutive GAL1 mutations.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie
Dokument erstellt am:	23.07.2003
Dateien geändert am:	12.02.2007
Promotionsantrag am:	21.07.2003
Datum der Promotion:	21.07.2003