Dokument: Prozessierung des Kartoffel-Spindelknollensucht-Viroids (PSTVd): Charakterisierung der beteiligten Enzyme der Wirtspflanze
Titel: | Prozessierung des Kartoffel-Spindelknollensucht-Viroids (PSTVd): Charakterisierung der beteiligten Enzyme der Wirtspflanze | |||||||
URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=2296 | |||||||
URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20020626-000296-7 | |||||||
Kollektion: | Dissertationen | |||||||
Sprache: | Deutsch | |||||||
Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
Medientyp: | Text | |||||||
Autor: | Klümper, Sandra Nicole [Autor] | |||||||
Dateien: |
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Beitragende: | Prof. Dr. Riesner, Detlev [Gutachter] Prof. Dr. Alfermann, August-Wilhelm [Gutachter] | |||||||
Stichwörter: | Viroid, Potato Spindle Tuber Viroid,PSTVd, Replikation, Prozessierung, Wirtsenzyme, Aminoacyl-tRNA-Synthetase,Schnitt, Ligation, Kernextrakt | |||||||
Dewey Dezimal-Klassifikation: | 500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie | |||||||
Beschreibung: | Für das zu den Pospiviroidae gehörende Potato Spindle Tuber
Viroid
(PSTVd) wurde gezeigt, dass geignete mehr-als-Einheitlängen
Transkripte in vitro im Kernextrakt zu korrekten Monomeren geschnitten
und zu Zirkeln ligiert werden. Es wurde ein mechanistisches Modell der
Viroidprozessierung vorgeschlagen, bei dem zunächst in einer
metastabilen verzweigten Substratkonformation ein einleitender
5´-Schnitt stattfindet. Nach einer Strukturumlagerung und einem
3´-Schnitt werden korrekte Zirkel ligiert. In dieser Arbeit wurde ausgehend von einem prozessierungsaktiven Kernextrakt aus einer nicht-infizierten Solanum tuberosum Zellkultur ein prozessierungsaktiver Kernextrakt aus einer PSTVd-infizierten Solanum demissum Zellkultur entwickelt. Proteine dieses Extraktes wurden mittels chromatographischer Proteintrennverfahren fraktioniert und mit einem mehr-als-Einheitslängen-Transkript auf Prozessierungsaktivität getestet. Es konnte gezeigt werden, dass die 5´-Schneide-, die 3´-Schneide- und die Ligationsaktivität von unterschiedlichen Enzymen vermittelt werden. Mit einem auf 5´-Schneideaktivität angereicherten Proteinextrakt, wurde das im mechanistischen Modell der Prozessierung vorgeschlagenen 5´-Schnittprodukt erstmals direkt nachgewiesen. Mittels Gelfiltrationsexperimenten konnte dem 5´-Schneideenzym ein Molekulargewichtsbereich von 23-66 kDa zugeordnet werden. Es wurde ein Proteinreinigungsprotokoll entwickelt, mit dem die 5´-Schneideaktivität stark angereichert werden konnte und wenigen, dominanten Proteinbanden zuordbar war. In Verbindung mit Bindungsuntersuchungen der angereicherten Proteine an das Prozessierungssubstrat, führte dies zur Identifizierung einer Aminoacyl-tRNA-Synthetase als mögliches 5´-Schneideenzym. Für drei weitere Proteine, war jedoch nicht sicher auszuschließen, dass auch sie die 5´-Schneideaktivität vermitteln könnten. | |||||||
Lizenz: | Urheberrechtsschutz | |||||||
Fachbereich / Einrichtung: | Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie | |||||||
Dokument erstellt am: | 26.06.2002 | |||||||
Dateien geändert am: | 12.02.2007 | |||||||
Promotionsantrag am: | 26.06.2002 | |||||||
Datum der Promotion: | 26.06.2002 |