Dokument: Prozessierung des Kartoffel-Spindelknollensucht-Viroids (PSTVd): Charakterisierung der beteiligten Enzyme der Wirtspflanze

Titel:Prozessierung des Kartoffel-Spindelknollensucht-Viroids (PSTVd): Charakterisierung der beteiligten Enzyme der Wirtspflanze
URL für Lesezeichen:https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=2296
URN (NBN):urn:nbn:de:hbz:061-20020626-000296-7
Kollektion:Dissertationen
Sprache:Deutsch
Dokumententyp:Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:Text
Autor: Klümper, Sandra Nicole [Autor]
Dateien:
[Dateien anzeigen]Adobe PDF
[Details]11,08 MB in einer Datei
[ZIP-Datei erzeugen]
Dateien vom 09.02.2007 / geändert 09.02.2007
Beitragende:Prof. Dr. Riesner, Detlev [Gutachter]
Prof. Dr. Alfermann, August-Wilhelm [Gutachter]
Stichwörter:Viroid, Potato Spindle Tuber Viroid,PSTVd, Replikation, Prozessierung, Wirtsenzyme, Aminoacyl-tRNA-Synthetase,Schnitt, Ligation, Kernextrakt
Dewey Dezimal-Klassifikation:500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie
Beschreibung:Für das zu den Pospiviroidae gehörende Potato Spindle Tuber Viroid (PSTVd) wurde gezeigt, dass geignete mehr-als-Einheitlängen Transkripte in vitro im Kernextrakt zu korrekten Monomeren geschnitten und zu Zirkeln ligiert werden. Es wurde ein mechanistisches Modell der Viroidprozessierung vorgeschlagen, bei dem zunächst in einer metastabilen verzweigten Substratkonformation ein einleitender 5´-Schnitt stattfindet. Nach einer Strukturumlagerung und einem 3´-Schnitt werden korrekte Zirkel ligiert.
In dieser Arbeit wurde ausgehend von einem prozessierungsaktiven Kernextrakt aus einer nicht-infizierten Solanum tuberosum Zellkultur ein prozessierungsaktiver Kernextrakt aus einer PSTVd-infizierten Solanum demissum Zellkultur entwickelt. Proteine dieses Extraktes wurden mittels chromatographischer Proteintrennverfahren fraktioniert und mit einem mehr-als-Einheitslängen-Transkript auf Prozessierungsaktivität getestet. Es konnte gezeigt werden, dass die 5´-Schneide-, die 3´-Schneide- und die Ligationsaktivität von unterschiedlichen Enzymen vermittelt werden. Mit einem auf 5´-Schneideaktivität angereicherten Proteinextrakt, wurde das im mechanistischen Modell der Prozessierung vorgeschlagenen 5´-Schnittprodukt erstmals direkt nachgewiesen. Mittels Gelfiltrationsexperimenten konnte dem 5´-Schneideenzym ein Molekulargewichtsbereich von 23-66 kDa zugeordnet werden.
Es wurde ein Proteinreinigungsprotokoll entwickelt, mit dem die 5´-Schneideaktivität stark angereichert werden konnte und wenigen, dominanten Proteinbanden zuordbar war. In Verbindung mit Bindungsuntersuchungen der angereicherten Proteine an das Prozessierungssubstrat, führte dies zur Identifizierung einer Aminoacyl-tRNA-Synthetase als mögliches 5´-Schneideenzym. Für drei weitere Proteine, war jedoch nicht sicher auszuschließen, dass auch sie die 5´-Schneideaktivität vermitteln könnten.
Lizenz:In Copyright
Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie
Dokument erstellt am:26.06.2002
Dateien geändert am:12.02.2007
Promotionsantrag am:26.06.2002
Datum der Promotion:26.06.2002
english
Benutzer
Status: Gast
Aktionen